LBD家族转录因子TtRa2和AtLBD37的表达与纯化

• 作者: 奚绪光 汤玮婧 王美艳 范三红 赵正阳 陈志刚
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: LBD家族转录因子 pHMT载体 表达纯化
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 173-178
• 页数: 6页
• 分类号: Q943.2
• 语种: 中文

摘要

[目的]由于LBD基因编码一类植物特有的空间结构尚未解析的转录因子,拟建立2种LBD家族成员(TtRa2和AtLBD37)及其DNA结合结构域的高效表达与纯化体系,为该家族转录因子的结晶研究奠定基础.[方法]以pET-21a表达载体为基架,设计并构建了pHMT载体,该载体在目标基因上游依次融合了His-tag、MBP和TEV蛋白酶酶切位点.将TtRa2和AtLBD37基因的完整编码区及其DNA结合结构域编码区分别插入pHMT载体,获得重组质粒pHMT-AtLBD37、pH MT-AtLBD37-BD、pHMT-TtRa2、pHMT-TtRa2-BD.将上述质粒导人E.coli表达菌株2566诱导表达,先使用amylose亲和柱纯化获得融合蛋白,再用融合His-tag的TEV蛋白酶切除融合蛋白TtRa2-BD中的His6-MBP双标签,使用Ni-NTA亲和层析柱去除TEV蛋白酶和His6-MBP标签,最后获得目标蛋白.[结果]TtRa2和AtLBD37及其DNA结合结构域均获得了高效可溶性融合表达,其表达量占细胞总蛋白的50％～70％;TtRa2-BD经2步亲和纯化后,每升菌液可获得15 mg纯度大于98％的目标蛋白.[结论]成功建立了2种LBD转录因子及其DNA结合结构域的高效表达和纯化体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王美艳	西北农林科技大学生命科学学院	7	86	4.0	7.0
2	奚绪光	西北农林科技大学生命科学学院	14	8	2.0	2.0
3	赵正阳	西北农林科技大学生命科学学院	6	36	3.0	6.0
4	汤玮婧	西北农林科技大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	陈志刚	西北农林科技大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0