RNAi沉默DNMT1基因对胰腺癌细胞ppENK甲基化状态的影响

• 作者: 卜淑蕊 钱家鸣
• 来源期刊: 临床与实验病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 RNA干扰 甲基化转移酶1 前脑啡肽原 甲基化
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R735
• 字数: 3187字
• 语种: 中文

摘要

目的 观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNMT1基因的表达对胰腺癌Panc-1细胞的前脑啡肽原(preproenkephalin,ppENK)基因甲基化状态的影响.方法 采用针对DNMT1的Stealth核糖核苷酸干扰(siRNA)胰腺癌细胞,观察DNMT1信使核糖核酸(mRNA)及DNMT1蛋白的表达;甲基化特异性PCR反应(MSP)检测不同处理组ppENK的甲基化状态.结果 Stealth RNAi转染到胰腺癌细胞Panc-1中48 h后,siRNA-3转染组的mRNA相对表达量和比率分别为0.116和32.9%,与空白对照组(0.352,100%)、脂质体对照组(0.346,98.2%)、RNAi阴性对照组(0.339,96.3%)相比差异有统计学意义(F=2.107 E4,P=0.000 1),转染组的mRNA相对抑制率为67.1%.siRNA-3转染组DNMT1蛋白相对表达量和比率分别为0.179和32.9%,与空白对照组(0.547,100%)、脂质体对照组(0.520,95%)、RNAi阴性对照组(0.535,97%)相比差异有统计学意义(F=2.195 E5,P=0.000 1).于100 bp和96 bp处可见ppENK基因特异性条带,呈现部分去甲基化状态的特点.结论 DNMT1靶向的Stealth RNA瞬时转染到胰腺癌细胞Panc-1中可明显沉默DNMT1的基因和蛋白的表达,逆转抑癌基因ppENK的高甲基化状态,为胰腺癌的基因治疗提供相关的理论依据.