日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

• 作者: 傅志强 朱传刚 李学珍 李浩 李祥瑞 杨健美 林矫矫 洪炀 石耀军 苑纯秀 陆珂
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 线粒体外膜转运酶34 克隆 表达 免疫定位
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 122-128
• 页数: 7页
• 分类号: R383.2
• 字数: 6160字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.02.004

摘要

目的 克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(SjTOM34),并对其生物特性进行初步研究.方法 应用RT-PCR方法从42 d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析.应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况.构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况.结果 获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1 083 bp.该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达,其中在35 d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体.成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有较好的免疫原性,在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在,并且主要分布在虫体的实质组织中.结论 获得了日本血吸虫SjTOM34基因,初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况,及在成虫中的分布.