日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估

• 作者: 傅志强 彭金彪 李晔 林矫矫 洪炀 王艳 石耀军 郭凡吉 陈实
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 nanos基因 抗原性 免疫保护
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 631-637
• 分类号: R383.2
• 字数: 5428字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.07.005

摘要

目的 扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果.方法 从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析.将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况.结果 同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp , 编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2.荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫.成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8% 的肝脏减卵率.结论 获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用.