日本血吸虫SjPRMT1基因的克隆、表达及表达产物的免疫保护效果分析

• 作者: 傅志强 刘金明 彭金彪 李祥瑞 林矫矫 洪炀 王欣之 石耀军 程国锋 韩宏晓
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 日本血吸虫 精氨酸甲基转移酶1 克隆 免疫保护 小鼠
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 835-841
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.04.022

摘要

[目的]克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1(SjPRMT1)编码基因eDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果.[方法]从实验室构建的7 d童虫消减eDNA文库中,获得一个EST序列,经序列测定和生物信息学分析命名为SjKMT1,以Sj cDNA为模板,获得其全长cDNA.荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况.以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果.[结果]获得了SjPRMTl编码基因的全长cDNA,开放阅读框为660 bp,编码219个氨基酸.荧光实时定量PCR分析该基因在18 d童虫高表达,13和23 d次之.获得了SjPRMT1重组蛋白,其具有良好的抗原性和免疫原性.在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得35.07%的减虫率和48.66%的肝脏减卵率.[结论]获得了日本血吸虫童虫期高表达的SjPRMTI基因的全长cDNA,成功构建了pET28a(+)-SjPRMT1重组质粒,该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果.