日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆和表达

• 作者: 刘述先 曹建平 韩海勃
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 硫氧还蛋白 克隆 表达 重组抗原
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1035-1038
• 页数: 4页
• 分类号: R383.24
• 字数: 3263字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.12.002

摘要

目的克隆和表达日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白(SjcTrx)的编码基因.方法根据日本血吸虫菲律宾株硫氧还蛋白基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI 酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入Sal I酶切位点和终止密码子TAA.以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SjcTrx基因.经双酶切并纯化的PCR产物与同样双酶切并纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcTrx,转化BL21感受态菌并大量扩增.重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定.pET28a-SjcTrx/BL21用IPTG 诱导表达.结果 SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334 bp,构建的重组pET28a-SjcTrx表达质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段.根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,约14 kDa.Western blotting显示该重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清和重组抗原免疫小鼠血清所识别.结论 SjcTrx基因的表达获得成功,并获得纯化蛋白,为开展动物保护性免疫试验创造了条件.