基因1型狂犬病病毒核酸巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 刘晔 张乐萃 张守峰 张菲 扈荣良 袁颖烁
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 巢式RT-PCR FAT MIT
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1227-1231
• 分类号: R535|S852.65
• 语种: 中文

摘要

针对我国狂犬病临床诊断的现实需求,本研究根据狂犬病病毒基因组核苷酸保守序列,设计巢式引物,对引物工作浓度和退火温度进行了优化,并对RT-PCR敏感性、特异性和重复性进行了检验.结果显示,巢式RT-PCR方法最低能够检测0.01 MILD50/30μL的脑组织病毒量,对阳性样品和非狂犬病感染样品的3次重复检测结果均与狂犬病诊断OIE推荐方法(荧光抗体染色法)的确定结果完全一致；在针对203份临床样品的检测中,FAT疑似样品通过MIT和巢式RT-PCR进一步确诊,巢式RT-PCR显示出较高的敏感性和特异性.以上表明,本研究建立的狂犬病病毒核酸巢式RT-PCR方法高度敏感和特异,可以用于FAT和MIT疑似样品的辅助检测,为试剂盒的研发与应用奠定基础.