禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽呼肠孤病毒(ARV) 单克隆抗体 制备 夹心ELISA 检测
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 49-52
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4484字
• 语种: 中文

摘要

将禽呼肠孤病毒(ARV) S1733株进行鸡胚增殖,增殖的病毒经浓缩、纯化后灭活,按每鼠100 μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠5次,每次间隔7d,第五次免疫3d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合及筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,用克隆的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体.抗体经Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光等方法进行检测验证.经验证的的单克隆抗体作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA方法检测ARV.对建立的方法进行特异性和敏感性试验.结果:筛选成功获得1株能稳定分泌抗ARV的单克隆抗体杂交瘤细胞株SF64 K5;免疫荧光和Dot-ELISA方法证明该单克隆抗体能特异性地检测ARV;间接ELISA方法测定腹水单克隆抗体效价达105以上,经亚型测定为IgG1,并且具有良好的特异性;用单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法特异性强,与对照的毒株新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)无交叉反应,检测的敏感性为5×10-5 μg/ μL的病毒量.结果表明,本试验建立的夹心ELISA检测ARV方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于ARV的检测.