Myod1和Myog真核共表达载体构建及鉴定

• 作者: 双卫兵 梁炳生 高宏飞
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织构建基础实验 Myod1 Myog 真核共表达载体 基因转染 基因测序 失神经支配 骨骼肌萎缩 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2013,（37）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 组织构建基础实验
• 页码范围: 6645-6651
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 6180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.37.017

摘要

背景：目前研究发现，生肌调节因子家族的各成员之间具有相互协同和相互促进的作用。因此，联合应用Myod1和Myog两个成员进行基因治疗，可能会取得更好的疗效，能够为防治失神经支配骨骼肌萎缩寻找新的思路。<br>　　目的：构建Myod1和Myog基因的真核共表达载体。<br>　　方法：通过RT-PCR的方法克隆大鼠Myod1和Myog基因的全长cDNA，酶切后依次插入到pVAX1载体中，以构建重组的Myod1和Myog真核共表达载体pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP，采用基因测序的方法进行鉴定。将pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP对体外培养的3T3细胞进行转染，利用Western blot检测3T3细胞中Myod1蛋白和Myog蛋白的表达，验证其能否正确表达目的蛋白。<br>　　结果与结论：基因测序结果表明，真核共表达载体 pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP 内的 Myod1和 Myog cDNA 的序列长度及碱基顺序均与所公布的序列相同。将该载体转染到体外培养的3T3细胞内， Western blot能够检测到3T3细胞中Myod1和Myog蛋白的条带。结果证实，实验成功构建了重组Myod1和Myog真核共表达载体pVAX1-Myod1-IRES2-Myog-IRES2-EGFP。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁炳生	山西医科大学外科学教研室	119	543	11.0	15.0
2	双卫兵	山西医科大学外科学教研室	90	455	11.0	16.0
3	高宏飞	山西医科大学外科学教研室	19	104	5.0	10.0