酿酒酵母磷酸胆碱胞苷转移酶基因(cct)的克隆表达及活性测定

• 作者: 夏冰 李晓丹 汪仁
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 磷酸胆碱胞苷转移酶基因 表达 CDP-胆碱合成
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 99-102
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 语种: 中文

摘要

以酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)基因组DNA为模板,克隆并表达了编码磷酸胆碱胞苷转移酶的基因cct.根据NCBI提供的序列信息,设计扩增cct基因的引物,经PCR扩增、酶切后,将cct插入到表达载体pET-29a(+)中,构建了重组质粒pET-29a-cct,经过酶切验证和测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在30℃条件下经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示构建的工程菌可高效表达相对分子质量约45 k的蛋白,与理论值相符.对粗酶液进行活性测定,表达产物可检测到CCT酶活性,即可转化CTP和磷酸胆碱为CDP-胆碱,此结果可为CDP-胆碱的生物合成提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏冰	江苏省中国科学院植物研究所	51	526	14.0	20.0
2	汪仁	江苏省中国科学院植物研究所	32	170	7.0	12.0
3	李晓丹	江苏省中国科学院植物研究所	6	10	2.0	3.0