细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶(TPase)活性测定方法的研究

• 作者: 冯璐 周长林 夏晓敏 邱蔚然
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 胸苷磷酸化酶 乙酰短杆菌 紫外分光光度法 细胞酶 酶活性 表观米氏常数
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 222-225
• 页数: 4页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文

摘要

β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶.该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法.β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反应后通过测量反应液300 nm处的吸光度,可测定反应中生成的胸腺嘧啶的量,从胸腺嘧啶的生成量的多少来判断胸苷磷酸化酶的活性.研究结果表明,在5％菌体浓度、10 mmol/L β-胸苷、0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.9)中,37℃反应20 min,即可准确测定胸苷磷酸化酶的活性.利用上述方法测定胸苷磷酸化酶活性,活性能达80％,高于前人报道的方法所测得的酶活性.其中,乙酰短杆菌来源的胸苷磷酸化酶的表观米氏常数Km为11.9 mmol/L.