慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

• 作者: 刘巧 李燕 竺丽梅 邵燕 陆伟 陈诚 韩晓冬
• 来源期刊: 南京大学学报（自然科学版）
• 关键词: 慢病毒(Lentivirus) 绿色荧光蛋白(GFP) 小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 转染 组织工程
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 883-889
• 页数: 7页
• 字数: 3139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13232/j.cnki.jnju.2014.06.017

摘要

运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后 MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对 MSCs 细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养 MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定 MSCs 纯度；Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染 MSCs,作用48 h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度；MTT 法检测转染后 MSCs 的细胞活力.诱导 MSCs-GFP 向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白 desmin 和α-SMA 的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的 MSCs 表达 CD44、CD90和CD105,不表达 CD34、CD45和 CD188,符合干细胞特性.MOI 为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原 desmin 和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源 MSCs 的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了 MSCs细胞,且此标记对 MSCs 的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆伟	江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所	81	604	14.0	21.0
2	李燕	南京大学医学院	36	211	8.0	12.0
6	竺丽梅	江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所	45	202	9.0	12.0
7	刘巧	江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所	28	143	6.0	11.0
8	邵燕	江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所	20	65	4.0	7.0
9	陈诚	江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所	30	152	8.0	11.0
10	韩晓冬	南京大学医学院	1	3	1.0	1.0