表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

• 作者: 严敏 孙茂盛 曹颖 李杨 李鸿钧 王晓囡 谢力
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 轮状病毒 NSP4 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140201

摘要

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果.方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒.电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达.肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果.结果:获得了滴度为10 8.25 CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达.二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8.结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性.滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答.