钙蛋白酶抑制蛋白转基因小鼠的构建和鉴定

• 作者: 叶廷巧 张彦 李丹 杨永健 杨芸 王强 苏立男 郑曦 马双陶
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 钙蛋白酶抑制蛋白 转基因 小鼠,模型 显微操作法
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 47-51
• 页数: 5页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.04.011

摘要

目的：将人的钙蛋白酶抑制蛋白（ calpastatin， CAST）外源基因整合到C57BL/6J小鼠中，构建高表达CAST的转基因小鼠模型。方法利用Gateway技术构建pRP．EX3d-EF1A-CAST-IRES-eGFP载体，回收片段后通过显微注射法将目的基因片段注入到C57 BL/6 J小鼠受精卵中，将其胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定出阳性的转基因小鼠，确定首建鼠，通过与C57BL/6J小鼠回交后互交数代建系。利用RT-PCR和Western blotting方法检测CAST基因和蛋白在各组织中的表达情况。结果将90枚注射受精卵移植到3只假孕鼠中，3只均怀孕，移植成功率100％，产下23只子鼠，经PCR鉴定得到2只转基因阳性首建鼠，阳性率为9％。子代小鼠进行RT-PCR检查显示，CAST基因在转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌中均有表达；Western blotting检查显示，CAST蛋白表达在转基因小鼠中显著高于同窝阴性小鼠。结论通过显微注射法成功构建CAST高表达的转基因小鼠，为进一步研究CAST奠定了良好的模型基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张彦	成都军区总医院心血管内科	133	506	10.0	18.0
2	杨永健		101	536	12.0	15.0
3	杨芸	成都军区总医院心血管内科	6	23	3.0	4.0
4	王强	成都军区总医院心血管内科	18	44	4.0	5.0
5	马双陶	成都军区总医院心血管内科	22	100	7.0	8.0
6	叶廷巧	成都军区总医院心血管内科	1	2	1.0	1.0
7	李丹	成都军区总医院心血管内科	2	2	1.0	1.0
8	郑曦	成都军区总医院心血管内科	1	2	1.0	1.0
9	苏立男	成都军区总医院心血管内科	1	2	1.0	1.0