利用 CRISPR／Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Ir s1）基因

• 作者: 于磊 张旭 张连峰 路迎冬 陈炜 马元武 马婧
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Irs1 基因敲除 大鼠 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 55-60
• 页数: 6页
• 分类号: R332
• 字数: 4238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2014.003.012

摘要

目的：为研究胰岛素受体底物1（Irs1）基因与代谢病之间的关系，我们利用CRISPR/Cas9系统敲除大鼠Irs1基因，为研究代谢病提供基因敲除大鼠。方法针对Irs1第一外显子，设计CRISPR/Cas9作用靶点，构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9。将Cas9 mRNA和sgRNA混合物注射入SD大鼠的受精卵中，实现靶基因敲除。用T7 EN1实验初步检测靶基因的修饰情况，再经过测序分析确定突变。结果获得了5个在Irs1基因突变的首建鼠，突变效率为83％。结论得到了稳定遗传的Irs1基因敲除大鼠。