单管巢式实时 PCR 检测麻风杆菌方法的建立及初步应用

• 作者: 吴兴中 唐三梅 方铭恒 曾维英 欧江丽 百顺 蓝银苑 薛耀华 覃晓琳 郑和平 黄进梅
• 来源期刊: 中国麻风皮肤病杂志
• 关键词: 麻风杆菌 单管巢式实时 PCR hsp18
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 579-582
• 页数: 4页
• 字数: 3270字
• 语种: 中文

摘要

目的：：明确单管巢式实时 PCR 检测麻风杆菌的特异性、灵敏性和重复性。方法：以麻风杆菌 hsp18基因为靶基因设计引物和探针，建立单管巢式实时 PCR 方法检测麻风杆菌并与抗酸染色及普通 PCR 进行特异性和灵敏性的比较。结果：单管巢式实时 PCR 检测下限为2.1 fg 质粒 DNA，普通PCR 为21 fg 质粒 DNA，敏感性高10倍；与8种非麻风杆菌无交叉反应；批内相对标准偏差(RSD)为0.24％~1.08％，批间 RSD 为0.09％~2.8％。对比检测54例麻风疑似标本中，抗酸染色、普通 PCR 和单管巢式实时 PCR 的敏感性分别为81.3％(26/32)、87.5％(28/32)和96.9％(31/32)。结论：单管巢式实时 PCR 特异性强、敏感性高且重复性好。