基于核酸杂交-酶联桥接分析法在 siRNA 药物定量分析中的应用

• 作者: 付洁 刘潜 孙云娟 宋海峰 张晶 李梦怡 欧伦
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核酸杂交-酶联桥接分析法 siRNA 药代动力学 组织分布
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 743-747
• 页数: 5页
• 分类号: R965.2
• 字数: 3379字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2014.05.010

摘要

目的：考察基于核酸的酶联桥接分析（ELBA）法定量分析生物基质中双链 siRNA 药物的反义链RNA 的可行性，为研究 siRNA 药物提供可靠的检测方法。方法在 LNCap 细胞空白基质中采用 ELBA 方法建立 siRNA 反义链的标准曲线（5~50000 pmol·L-1）。LNCap 细胞中转染双链 siRNA（终浓度100 nmol·L-1），24 h 后取上清、细胞裂解物及 RNA 诱导沉默复合体（RlSC），根据标准曲线对各组分中反义链 RNA 浓度进行定量。分别配制含双链 siRNA 5~25000 pmol·L-1或反义 siRNA 5~25000 pmol·L-1的小鼠全血浆样品，用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义 siRNA 3~6250 pmol·L-1样品，考察 ELBA 方法对血浆和生物基质中 siRNA 反义链进行定量的特异性和定量范围。sc 给予 C57小鼠 LNCap 细胞制备移植瘤模型，iv 给予双链 siRNA 药物15 nmol·kg-1，30 min 后 ELBA 法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA 浓度。结果基于 ELBA 方法对细胞基质中反义链 siRNA 定量范围为5~50000 pmol·L-1，且ELBA可以对转染双链 siRNA 的细胞裂解物和 RlSC 复合物中的反义链 siRNA 进行特异定量。ELBA 对血浆中双链 siRNA 中的反义链无响应，对血浆和组织中 siRNA 反义链的定量分析范围分别为5~25000 pmol·L-1和3~3125 pmol·L-1。双链 siRNA 在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30 min 后，ELBA 检测发现，反义链 RNA 分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论 ELBA 方法可用于 siRNA 药物的反义链的定量分析及组织分布研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付洁	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室	17	39	3.0	5.0
2	欧伦	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室	7	7	2.0	2.0
3	张晶	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室	11	67	5.0	8.0
4	孙云娟	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室	2	3	1.0	1.0
5	李梦怡	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室	1	2	1.0	1.0