基于DENV-prM/E基因构建DENV-VLP及其免疫学特性

• 作者: 刘岩 周俊梅 喻治准 方丹云 江丽芳 罗雅艳
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 病毒样颗粒 免疫应答
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 494-499
• 页数: 6页
• 分类号: R373.3
• 字数: 2615字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性.[方法]用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达.切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化.免疫三组Balb/C小鼠,每组15只.采用间接ELISA检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的细胞.[结果]重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径20～ 30hm的球形颗粒,VLP免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ELISPOT结果提示DENV4-VLP与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的细胞数目明显增加,各组分泌IL-10细胞数目的整体水平均不高.[结论]应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可诱导Balb/C小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Th1型免疫应答而诱导Th2型免疫应答较弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方丹云	中山大学中山医学院微生物学教研室	35	121	6.0	8.0
2	江丽芳	中山大学中山医学院微生物学教研室	68	274	7.0	12.0
3	周俊梅	中山大学中山医学院微生物学教研室	17	67	4.0	7.0
4	刘岩	中山大学热带病防治研究教育部重点实验室	9	33	4.0	5.0
5	罗雅艳	中山大学热带病防治研究教育部重点实验室	3	15	2.0	3.0
6	喻治准	中山大学中山医学院微生物学教研室	1	0	0.0	0.0