小鼠睾丸组织特异表达基因Rnf148的鉴定及其编码E3泛素连接酶的功能分析

• 作者: 刘运强 廖顺尧 张思仲 杨元 陶大昌 马用信
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 小鼠 Rnf148基因 睾丸特异表达 环指结构域 E3泛素连接酶
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 语种: 中文

摘要

目的 研究小鼠Rnf148基因表达的时空特异性及其环指结构域的E3泛素连接酶功能.方法 提取不同成年小鼠组织、不同胚胎期组织和出生后小鼠睾丸组织的总RNA,通过实时荧光RT-PCR和Northern杂交分析小鼠Rnf148基因的表达谱.构建包含整个Rnf148蛋白的环指结构域与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白原核表达载体,在BL21细菌中诱导表达后,经GST琼脂糖凝胶纯化GST-Rnf148重组蛋白.体外泛素化反应试验检测GST-Rnf148重组蛋白的E3泛素连接酶功能.结果 在小鼠13种不同器官组织中,Rnf148 mRNA仅存在于睾丸组织中.进一步Northern杂交验证了只在小鼠睾丸组织表达一个1.2 kb左右的Rnf148基因mRNA片段.小鼠Rnf148基因在胚胎期及出生后3周内不表达,出生后21 d开始表达,25 d后达到表达高峰并一直持续表达.实验成功诱导表达并纯化了GST-Rnf148重组蛋白,体外蛋白泛素化反应显示该重组蛋白具有E3泛素连接酶的功能.结论 小鼠Rnf148基因特异地表达在出生3周后的睾丸组织中,Rnf148蛋白的环指结构域具有泛素连接酶活性.