版纳微型猪近交系RNF148基因生物信息分析、组织差异表达及亚细胞定位

• 作者: 宋雪 张霞 李罗刚 梁六金 王配 王雪飞 霍海龙 霍金龙
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 指环蛋白148 版纳微型猪近交系(BMI) 组织表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 页码范围: 95-99
• 页数: 5页
• 分类号: S828.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2018.0062

摘要

指环蛋白RNF148与睾丸形成和精子发生密切相关.本研究以猪及其他近缘物种的RNF148 mRNA为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)睾丸组织中扩增RNF148基因完全编码序列;对RNF148蛋白质序列进行生物信息学分析,预测其功能,并构建RNF148的多物种系统进化树;应用实时荧光定量PCR技术检测BMI 15个重要组织的RNF148 mRNA转录表达水平;构建真核表达载体,转染猪睾丸细胞系,并进行亚细胞定位分析,检测该蛋白在细胞中的表达部位.结果表明:扩增得到BMIRNF148编码区序列长912 bp,编码303个氨基酸;RNF148包含3个保守结构域PA_GRAIL_like、RINGUbox和zf-rbxl超家族,存在1个跨膜螺旋结构,有N端信号肽序列,二级结构以α螺旋为主,N末端和C末端均疏水,有4类功能活性位点,在进化中高度保守,91.4％位于细胞质中;在睾丸中特异高表达,在心、肝等其他14个组织中相对低表达;成功构建了融合的绿色荧光蛋白真核表达载体,并确定RNF148多在细胞质中表达.研究结果为探索RNF148基因在BMI公猪繁殖性能方面的作用奠定了基础.