RNA干扰技术体外抑制内质网分子伴侣GRP94在卵巢癌细胞表达的研究

• 作者: 张丽颖 徐爱丽 李佩玲 艾丽敏
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢癌 RNAi GRP94
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传学与PCR技术
• 页码范围: 16-20
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文

摘要

目的 利用RNA干扰技术,构建葡萄糖调节蛋白94(GRP94)靶向的RNA干扰质粒载体,观察其对卵巢癌细胞株H0-8910 GRP94基因表达的抑制作用及其对阿霉素(ADM)耐药的逆转作用.方法 设计能转录小发卡结构RNA的DNA序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入卵巢癌细胞株H0-8910内,实验分为3组,特异性siRNA组(HO-8910/siRNA组),非特异性siRNA组(HO-8910/NC siRNA组)和空白对照组(H0-8910组),用RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测GRP94 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素化学敏感性的变化.结果 成功构建RNA干扰质粒载体,转染针对GRP94的siRNA后24、48、72h,H0-8910的GRP94基因和蛋白水平明显下降;细胞凋亡增加;转染GRP94 siRNA后,H0-8910对阿霉素的敏感性显著增加.结论 构建的RNA干扰真核表达载体能明显抑制GRP94 mRNA及蛋白的表达,促进细胞凋亡,通过降低卵巢癌细胞中GRP94的表达能增加其对阿霉素的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略.