大鼠β-catenin miRNA表达载体的构建及在脂肪干细胞中沉默效果的检测

• 作者: 于湄 刘爽 田卫东 罗小昕 郭维华 黄海森
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 脂肪干细胞 β-catenin miRNA 表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 749-753
• 语种: 中文

摘要

目的 构建具有沉默大鼠脂肪干细胞β-catenin表达的miRNA(miR)表达载体.方法 通过酶切法将合成的miR表达载体寡聚核苷酸引物与质粒pSWH相连,形成pSW H-miR; PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)开放阅读框,插入经双酶切处理的pSWH-miR形成pSWH-EGFP-miR.β-catenin miR表达质粒瞬时转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells derived from rats,rADSCs),72 h后提取细胞全蛋白,Western blot检测β-catenin的表达情况.结果 针对大鼠β-catenin的不同位点,一共构建了5个miRNA表达载体(miR-780、miR-796、miR-1467、miR-1948、miR-1960),其中miR-780、miR-796对β-catenin沉默效果最好(P＜0.05),miR-1960的沉默效果次之(P＜0.05),miR-1467、miR-1948不具有沉默效果(P＜0.05).结论 miR-780、miR-796能够有效沉默SD大鼠脂肪干细胞中β-catenin的表达.