大鼠IP3R1 miRNA慢病毒表达载体的构建及其沉默效应鉴定

• 作者: 刘展 刘燕 彭聿平 王树树 陈玉萍 高璀乡
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNAs 慢病毒感染 肌醇1,4,5-三磷酸受体
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 989-992,996
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大鼠IP3R1 miRNA慢病毒表达载体,并利用PC12细胞株观察其对IP3R1基因的沉默效应.方法 根据已公布的IP3R1基因序列(GenBank No. NM_001007235),设计并合成4对miRNA的Oligo DNA(miRNA1、miRNA2、miRNA3和miRNA4),退火形成双链DNA后,与载体pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-IP3R1表达载体;用Gateway技术将该表达载体先后与中间载体pDONRTM221、慢病毒载体pLenti6/V5-DEST连接,构建慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-IP3R1,包装产生慢病毒,收集上清,感染PC12细胞株,用Real-time PCR和Western blotting技术检测慢病毒表达载体对PC12细胞内IP3R1表达的沉默效应.结果 测序结果表明,4对pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-IP3R1表达载体序列与参考序列一致,将重组获得的慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-IP3R1转染至PC12细胞株,48h后IP3R1的mRNA和蛋白表达下调,以miRNA2和miRNA3的沉默效应最佳.结论 成功构建了大鼠IP3R1慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-IP3R1,其可使大鼠PC12细胞株IP3R1表达下调,为利用RNA干扰技术进一步研究细胞内钙释放通道的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王树树		21	34	3.0	4.0
2	高璀乡		34	80	6.0	7.0
3	刘燕	南通大学生理教研室	16	27	3.0	4.0
4	彭聿平	南通大学生理教研室	51	295	9.0	16.0
5	刘展	南通大学生理教研室	12	54	3.0	7.0
6	陈玉萍		3	4	1.0	2.0