金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 孙鹏 王俊瑞 王艳艳 韩艳秋 魏常梅
• 来源期刊: 内蒙古医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 肠毒素A 多克隆抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论摇 摇 著
• 页码范围: 481-486
• 页数: 6页
• 分类号: R37
• 字数: 3972字
• 语种: 中文

摘要

目的：制备金黄色葡萄球菌肠毒素A( SEA)多克隆抗体并用金黄色葡萄球菌野生株对其进行验证,为进一步研究SEA在金黄色葡萄球菌致病机制中的作用提供基础。方法：PCR方法扩增肠毒素A基因( sea),构建原核表达载体pET 30 a/sea,经PCR方法和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌DH 5α,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE)和蛋白质印迹法( Western Bloting,WB)分析鉴定。蛋白经纯化后作为免疫原免疫新西兰大白兔,得到抗血清并纯化,采用sea基因阳性的金黄色葡萄球菌野生株S 8和S 23株的菌体蛋白进行鉴定。结果：pET 30 a/sea重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统中可实现高表达,纯化后得到高纯度的SEA蛋白,经临床分离金黄色葡萄球菌S 8和S 23株菌体蛋白验证,证实得到理想的兔抗SEA多克隆抗体。结论：通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌SEA蛋白在构建的原核表达系统中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究金黄色葡萄球菌肠毒素A蛋白的生物学活性及抗体的保护作用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩艳秋	内蒙古医科大学附属医院检验科	85	364	10.0	15.0
2	王俊瑞	内蒙古医科大学附属医院检验科	41	126	7.0	10.0
3	魏常梅	内蒙古医科大学附属医院检验科	5	5	1.0	1.0
4	孙鹏	内蒙古医科大学微生物研究室	29	90	5.0	8.0
5	王艳艳	内蒙古医科大学附属医院检验科	23	69	4.0	7.0