靶向人核糖核酸酶抑制因子双抗性的 shRNA 逆转录病毒载体构建及鉴定

• 作者: 丁宁 李坤
• 来源期刊: 大连医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人核糖核酸酶抑制因子 shRNA 逆转录病毒载体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 423-426
• 页数: 4页
• 分类号: R394.33
• 字数: 2366字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11724/jdmu.2014.05.04

摘要

目的：构建靶向人核糖核酸酶抑制因子（ hRI）新霉素-潮霉素B双抗性的shRNA逆转录病毒载体，为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用机制提供依据。方法用亚克隆法，将潮霉素B抗性基因hygr从载体pIRES-hygr2克隆到pLNCX-pKD-dsRI-neor与pLNCX-pKD-neor 上，用酶切筛选得到阳性重组质粒pLNCX-pKD-dsRI-neor -hygr与pLNCX-pKD-neor -hygr。转染时设干扰组、空载体组和空白组。用脂质体法将pLNCX-pKD-dsRI-neor （干扰组）、pLNCX-pKD-neor -hygr （空载体组）转染到人肝癌细胞SMMC77细胞中，未处理的细胞作空白组，用400 mg/L G418和200 mg/L潮霉素B筛选3～4周产生稳定的细胞克隆后，用Western blotting检测细胞中核糖核酸酶抑制因子表达的变化。结果酶切结果证明重组质粒构建成功；Western blotting表明，与空白组（0．1810±0．015）和空载体组（0．1951±0．027）相比，干扰组RI表达（0．0311±0．048）明显下调（P＜0．05）。结论成功构建的靶向人核糖核酸酶抑制因子新霉素-潮霉素B双抗性的shRNA逆转录病毒载体能下调RI基因的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李坤	大连大学医学院生物化学与分子生物学教研室	48	216	7.0	13.0
2	丁宁	大连大学医学院生物化学与分子生物学教研室	36	57	5.0	6.0