新型人源化抗CD20单克隆抗体的表达和活性检测

• 作者: 刘子敬 刘萱 曹诚 李平 贾茹 靳彦文 高婷
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗原,CD20 抗体,单克隆 人源化
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 875-878
• 页数: 4页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 3399字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.11.009

摘要

目的：制备新型人源化抗CD20单克隆抗体并检测其与CD20抗原的亲和力和抗肿瘤活性。方法通过计算机模建技术，在蛋白质结构数据库中找到与利妥昔单抗（ rituximab）空间结构最相近的人IgG1为骨架，将利妥昔单抗的互补决定区（ complementarity determining region ，CDR）进行移植和改造，通过重叠PCR方法，扩增出目的基因片段。分别将轻链（L）、重链（H）基因片段克隆到载体pcDNA3．3、pOptiVEC质粒上。瞬时转染至293F细胞，收取细胞上清，用rProteinA亲和层析法纯化目的抗体，并用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检验抗体的纯度和表达量，采用Fortebio技术检测抗体与抗原的结合能力，最后通过裸鼠移植瘤生长抑制实验检测抗体的抗肿瘤活性。结果构建了3种抗CD20人源化抗体。抗体在还原SDS-PAGE中表现为两条相对分子质量约为25×103和55×103的条带，与预计条带大小相符；Fortebio实验结果表明，3组抗体与抗原具有良好的亲和活性：利妥昔单抗、L4H7抗体、L5H5抗体和L5H7抗体的Kd值分别为6．48×10－9、1．91×10－9、7．35×10－10和1．91×10－9 mol／L。裸鼠移植瘤生长抑制实验表明，L5H7抗体的抗肿瘤活性优于利妥昔单抗。结论成功构建并表达了3种抗CD20人源化抗体，其中L5H7抗体具有良好的抗原结合能力和抗肿瘤活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	李平	军事医学科学院生物工程研究所	63	162	6.0	9.0
3	刘萱	军事医学科学院生物工程研究所	42	105	6.0	8.0
4	靳彦文	军事医学科学院生物工程研究所	15	90	6.0	9.0
5	高婷	军事医学科学院生物工程研究所	7	10	2.0	3.0
6	贾茹	安徽大学生命科学学院	4	10	2.0	3.0
10	刘子敬	军事医学科学院生物工程研究所	1	3	1.0	1.0