烟草TILLING技术体系的建立及NtPhyB基因的筛选

• 作者: 刘贯山 孙玉合 宗鹏 李凤霞 王倩 陈雅琼 龚达平
• 来源期刊: 中国烟草科学
• 关键词: 功能基因组学 TILLING 烟草 化学诱变 突变体
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 32-36
• 页数: 5页
• 分类号: S572
• 语种: 中文
• DOI: 10.13496/j.issn.1007-5119.2014.02.006

摘要

定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量的摸索，确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物（1μM）适用量为0.32～0.64μL，IRDye-800标记的反向引物（1μM）适用量1.12～1.6μL；对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明，10μL PCR产物中加入0.6μL CEL I酶，1.5μL 10× Buffer酶切效果最好。从而建立并优化了适用于普通烟草基因组研究的TILLING技术体系。在此基础上，以NtPhyB为目标基因，在1000份0.6% EMS诱变的M2突变体中进行筛选，共得到13个突变体，该基因突变频率约为1/94 kb。本试验建立的TILLING筛选体系能够快速、高效地筛选任意已知序列基因的突变体，对烟草功能基因组研究具有重要意义。