肺炎链球菌热休克蛋白ClpE多克隆抗体的制备及其亚细胞定位

• 作者: 何於娟 尹一兵 张群 张雪梅 王虹 胥文春 蔡莺莺 闫文娟
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 热休克蛋白 ClpE 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 28-32
• 分类号: R378.1+4|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 制备肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)ClpE多克隆抗体,并确定ClpE在S.pn表面的亚细胞定位.方法 应用PCR法从S.pn D39中扩增coE基因全长片段,克降入原核表达载体pET28a,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法鉴定抗体的特异性.ELISA法分析ClpE在S.pn表面的亚细胞定位.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的重组ClpE蛋白相对分子质量约83 000,表达量约占全菌总蛋白的60％,主要以可溶性上清形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90％;制备的ClpE多克隆抗体效价达1∶4 096 000,可与S.pn D39全菌发生特异性反应,S.pn D39在正常生长时可表达ClpE蛋白;ClpE在S.pn表面有表达.结论 成功制备了高效价和特异性的ClpE多克隆抗体,ClpE在S.pn表面可正常表达,为表面蛋白.