肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 张群 张雪梅 钟文 陈倩 黄远帅
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 SpxA表达纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 475-478
• 分类号: R378.14
• 字数: 3498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.06.002

摘要

目的 构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a(+)内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果 从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1:2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论 成功构建了pET-28a(+)-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的 蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张雪梅	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	75	270	9.0	13.0
2	陈倩	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	10	47	3.0	6.0
3	钟文	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	张群	重庆医科大学附属儿童医院检验科	7	28	3.0	5.0
5	黄远帅	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	8	29	4.0	5.0