树鼩呼肠孤病毒 RT-nPCR 检测方法的建立及初步应用

• 作者: 代解杰 孙晓梅 张媛 李晓飞 殷安国 罗军
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 树鼩 哺乳动物呼肠孤病毒 反转录巢式聚合酶链式反应 巢式引物
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: R33
• 字数: 4426字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2014.006.014

摘要

目的：建立树鼩呼肠孤病毒（ TRV） RT-nPCR检测方法，为树鼩的质量控制提供检测方法。方法从三批野外来源的具有感染临床症状的树鼩粪便中分离得到三株病毒，经电镜观察和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为哺乳动物呼肠孤病毒（MRV）。根据GenBank 中已发表的MRV L1基因的保守区域，设计合成巢式引物，对所分离的三株树鼩呼肠孤病毒（TRV1、TRV2、TRV3）的RNA 进行RT-nPCR 扩增，优化反应条件，进行特异性、敏感性试验。应用RT-nPCR 方法对25只野外来源的相同症状疑似病例样本进行检测。结果针对分离到的三株树鼩呼肠孤病毒的RNA 进行RT-nPCR 扩增，均得到513 bp 的特异性目的片段，培养细胞及甲肝病毒、轮状病毒、单纯疱疹病毒阴性对照均未扩增出条带。敏感性试验结果显示可检测到的最小RNA 模板浓度为0.01 pg／μL。25只树鼩粪便样本经RT-nPCR 检测，有14只TRV 阳性，其中死亡动物组10只，检出率为100％；存活动物组15只，检出率为27％。结论建立的TRV RT-nPCR 检测方法特异、敏感、稳定，可用于TRV 的常规检