鹅坦布苏病毒 E蛋白质结构域 I和 II在大肠杆菌中的表达及鉴定

• 作者: 刘宇卓 刘晓燕 李银 谢星星 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅坦布苏病毒 E蛋白质 结构域Ⅰ和Ⅱ 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 590-594
• 页数: 5页
• 分类号: S851.34+7.2
• 字数: 3721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2014.03.022

摘要

为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段，并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK)，构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达目的蛋白质，并对其进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示， PCR扩增得到约900 bp的目的片段，经鉴定成功构建重组表达载体pET28a-E-I/II。重组菌在IPTG诱导4 h后在37000处出现目的蛋白质并且表达量达到高峰。经超声波破碎后SDS-PAGE分析显示，融合蛋白质以包涵体形式存在。 Western-blot结果显示，重组蛋白质与FLAG单抗和E蛋白质阳性血清均可发生特异性反应。表明鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中成功表达，经鉴定重组蛋白质具有良好的免疫反应性。