登革Ⅱ型病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域在大肠杆菌中的表达及免疫反应性鉴定

• 作者: 付宇姣 郑学礼
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 E蛋白 第I-II结构域 表达 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 425-428
• 分类号: R373.3
• 字数: 3184字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2012.05.004

摘要

目的 在大肠杆菌中表达登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白(E)的第一,二结构域(DⅠ/Ⅱ)并进行免疫反应性鉴定.方法 登革II型病毒接种乳鼠,提取总RNA,经RT-PCR扩增目的 基因片段.双酶切PCR纯化产物和质粒pET-28a(+)并连接构建重组质粒pET28a- DV2-E-D1&2.筛选阳性菌落,提取质粒并转化感受态细胞,IPTG诱导表达目的 蛋白并进行SDS-PAGE分析,Western blot 鉴定.结果 RT-PCR扩增得到约900 bp的目的 基因片段,双酶切及测序分析表明,插入序列正确且开放读码框正确.重组菌诱导后在37 kD位置有明显的诱导后表达带,其大小与预测值一致.经12%SDS-PAGE分析,显示重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;Western blot结果 显示重组蛋白与His·Tag单抗和登革病毒单抗(D1-11)均发生反应.结论 成功地在大肠杆菌中表达登革II型病毒包膜糖蛋白(E)的DⅠ/Ⅱ,免疫反应性鉴定结果 表明其具有良好的免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑学礼	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	50	159	7.0	9.0
2	付宇姣	南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系	3	6	2.0	2.0