基于荧光定量PCR的鳜传染性脾肾坏死病毒滴度检测方法

• 作者: 付小哲 吴淑勤 李宁求 林强 石存斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鳜 传染性脾肾坏死病毒 疫苗 滴度 定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 1573-1578
• 分类号: S943
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.49214

摘要

针对传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的ORF007基因,设计特异性引物及TaqMan探针,建立了ISKNV的实时荧光定量PCR方法.采用CPE法对连续10倍稀释的ISKNV培养液的滴度进行了测定,同时采用荧光定量PCR法测定病毒拷贝数.结果显示,荧光定量PCR测定的病毒拷贝数与CPE法测定的病毒滴度具有良好的线性关系,其线性方程为y=1.076x+0.545(R2=0.998 6),其中y为基因组拷贝数浓度的对数,x为病毒滴度TCID50的对数.研究表明,荧光定量PCR法可替代CPE法应用于ISKNV疫苗抗原的定量,大大缩短了疫苗制备的时间,为疫苗生产提供了方便.