猪血清中牛病毒性腹泻病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 傅光华 徐磊 施少华 曾亮明 林伯全 林拱阳 王玉玲 程龙飞 陈先进
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪源牛病毒性腹泻病毒 ELISA 血清学 抗体 检测
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 944-950
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为建立检测猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,经ELISA反应条件优化、特异性试验、重复性试验及与中和法、IDEXX ELISA对比试验建立了特异性ELISA.用此方法对福州市周边20个猪场的222份猪血样进行了BVDV抗体检测.结果显示,本ELISA反应条件为:BVDV Oregon C24V与NADL株联合包被(质量浓度均为31.25 μg/L,每孔加50 μL)的条件为37℃ 1 h加4℃8h,家兔抗猪瘟病毒(CSFV)超免疫血清(每孔血清效价可中和400 RID CSFV)阻断时间为2.0h,封闭剂和血清稀释液中NaC1的浓度和Tween-20的体积分数分别为0.7 mol/L和3.00 mL/L,100 mL/L马血清封闭剂、1:50稀释的待检血清、0.625 mg/L HRP-家兔抗猪IgG酶标二抗(100 μL/孔)及底物的反应时间分别为2.0、0.5、0.5h及15 min;检测CSFV、伪犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性;4份血样进行5次板内、板间重复试验结果均一致;参照中和试验,本ELISA方法的符合率(97.9％)高于IDEXX BVDV ELISA抗体检测试剂盒(93.8％);福州市周边猪群BVDV抗体阳性率为34.7％,猪场阳性率为80.0％,其中母猪群阳性率(44.6％)高于商品猪群(26.4％).结果表明,本ELISA方法特异性强、符合率高、重复性好,适合用于猪源BVDV的血清学监测.