红色原鸡外周血单个核细胞IFN-γ的诱导表达及其荧光定量PCR检测

• 作者: 冀斌 孙亭亭 张雄伟 胡文丽 陈培富 马志亮 鲁琼芬
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 红色原鸡 干扰素γ Con A诱导 荧光定量PCR 外周血单个核细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 102-108
• 页数: 7页
• 字数: 4367字
• 语种: 中文

摘要

为建立检测红色原鸡外周血单个核细胞（PBMC）中干扰素γ（IFN-γ）mRNA表达水平的方法，通过优化刀豆蛋白A（Con A）诱导PBMC表达IFN-γ的条件，采用RT-PCR方法以3-磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）基因为内参扩增IFN-γ基因，插入克隆载体pMD18-T分别构建重组质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH，以其作为标准品采用SYBR Green I染料法建立荧光定量PCR检测方法，并将该方法应用于34只红色原鸡PBMC IFN-γ表达量的检测。结果发现，PBMC在20μg/mL Con A刺激培养12-25 h时IFN-γ处于高表达水平；标准品质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH分别在拷贝数6.72×102-6.72×109、3.94×102-3.94×109范围内与其对应的Ct值呈现良好的线性关系（R2>0.99），扩增产物的熔解曲线均只有特异的单峰，表明所用引物特异性强。在优化Con A诱导红色原鸡PBMC表达IFN-γ条件的基础上，建立了可用于定量检测红色原鸡PBMC IFN-γmRNA表达水平的荧光定量PCR方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈培富	云南农业大学动物科学技术学院	44	165	5.0	12.0
2	马志亮	云南农业大学动物科学技术学院	6	10	2.0	3.0
3	孙亭亭	云南农业大学动物科学技术学院	8	7	2.0	2.0
4	鲁琼芬	云南农业大学动物科学技术学院	22	28	4.0	4.0
5	胡文丽	云南农业大学动物科学技术学院	4	3	1.0	1.0
6	冀斌	云南农业大学动物科学技术学院	3	1	1.0	1.0