红色原鸡IFN-γ基因的克隆及原核表达

• 作者: 冀斌 孙亭亭 胡文丽 陈培富 马志亮
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 红色原鸡 IFN-γ 不对称PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 47-51
• 页数: 5页
• 分类号: S852.43|Q786
• 字数: 4294字
• 语种: 中文

摘要

应用能够选择性克隆同源双链DNA的方法(PCR+1)从刀豆蛋白A诱导的红色原鸡外周血淋巴细胞中扩增γ干扰素(IFN-γ)编码区基因,双酶切后连接至克隆载体pUC18.以阳性质粒为模板扩增IFN-γ成熟肽基因,连接至原核表达载体pProEXTM HTb,筛选出阳性重组质粒HTb-IFN-γ;重组质粒在大肠埃希菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果表明,采用PCR+1方法扩增得到560 bp IFN-γ编码区基因,成功连接至克隆载体并以此为模板扩增出473bp成熟肽基因,构建的重组表达质粒HTb-IFN-γ在BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达出分子质量约为21ku的IFN-γ.Western blot分析显示,表达的IFN-γ能够与抗IFN-γ多克隆抗体特异性反应,具有良好的免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈培富	云南农业大学动物科学技术学院	44	165	5.0	12.0
2	马志亮	云南农业大学动物科学技术学院	6	10	2.0	3.0
3	孙亭亭	云南农业大学动物科学技术学院	8	7	2.0	2.0
4	胡文丽	云南农业大学动物科学技术学院	4	3	1.0	1.0
5	冀斌	云南农业大学动物科学技术学院	3	1	1.0	1.0