延边白鹅IFN-γ基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 于清洋 刘恩平 张立媛 张颖 梁晚枫 陈海迪 高旭 鲁承
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 延边白鹅 IFN-γ基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧? 兽医
• 页码范围: 126-129
• 页数: 4页
• 分类号: S852.4
• 字数: 3608字
• 语种: 中文

摘要

为制备抗延边白鹅IFN-γ蛋白的多克隆抗体,以已制备的pMD-IFN-γ质粒为模板,通过PCR扩增到延边白鹅IFN-γ基因,经TA克隆和BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将目的基因亚克隆至pGEX-4 T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21( DE3),进行 IPTG诱导表达,将经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确的重组蛋白用GST标签纯化试剂盒纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行ELISA检测。结果显示,成功构建了原核表达载体pGEX-IFN-γ,表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为43 ku,制备的小鼠抗IFN-γ多克隆抗体效价为1∶16000。