鸭疫里默氏杆菌表面抗原D15截短蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 刘菲 刘马蜂 奉彬 朱德康 杨乔 汪铭书 程安春 贾仁勇 陈舜
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭疫里默氏杆菌 tD15蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 页码范围: 1166-1172
• 页数: 7页
• 分类号: S852.615
• 语种: 中文

摘要

为制备抗鸭疫里默氏杆菌(RA)tD15蛋白的单克隆抗体并对其特性进行鉴定,应用纯化复性的重组tD15蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,应用有限稀释法筛选出抗RAtD15重组蛋白的阳性杂交瘤细胞株;采用腹水诱生法制备单克隆抗体腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力.结果显示,获得2株抗RA tD15蛋白的阳性杂交瘤细胞株,遂被命名为4#、16#,2株细胞株经反复冻存复苏,体外传代仍能稳定分泌抗体;4#单克隆抗体属于IgG1,κ链;16#单克隆抗体属于IgG2b,κ链;4#杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200,腹水效价为1∶12 800,16#杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶6 400,腹水效价为1∶ 204 800;2株单克隆抗体均能够识别大小约为34 ku的蛋白,说明这2株单克隆抗体是特异性识别tD15蛋白的抗体;这2株单克隆抗体能够与鸭疫里默氏杆菌全菌裂解蛋白发生特异性反应,而不与其他鸭源的病原体发生反应;测得它们的亲和常数分别为1.52×109 L/mol和1.00×1010 L/mol.结果表明,这2株单克隆抗体可能识别两种不同的抗原表位.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程安春		128	1214	19.0	30.0
2	贾仁勇		56	386	12.0	18.0
3	汪铭书		97	986	18.0	28.0
4	陈舜		10	9	2.0	3.0
5	刘菲		20	83	4.0	9.0
6	朱德康		13	82	4.0	9.0
7	奉彬		1	0	0.0	0.0
8	刘马蜂		1	0	0.0	0.0
9	杨乔		3	0	0.0	0.0