日本脑炎病毒基因Ⅰ型与Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立

• 作者: 伍锐 刘澣扬 张亮 文心田 文翼平 曹三杰 石双艳 袁磊 黄小波
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 日本脑炎病毒 复合RT-PCR 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 419-424
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为建立一种简单快捷的鉴别日本脑炎病毒(JEV)基因Ⅰ型与基因Ⅲ型的方法,根据基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的保守序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1、P3和P2、P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型与Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并用建立的方法对27份临床样品进行了检测.结果显示,以设计合成的引物进行复合RT-PCR扩增,得到与基因Ⅰ型JEV预期相符的381 bp的特异性条带,得到与基因Ⅲ型JEV预期相符的550 bp的特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病病毒核酸的扩增结果均为阴性.敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为1.0 pg/μL和10 pg/μL.利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品进行检测,结果5份为基因Ⅰ型,2份为Ⅲ型,与核苷酸序列分析结果一致.结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于检测及鉴别基因Ⅰ型与基因Ⅲ型JEV.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田		100	612	14.0	19.0
2	曹三杰		89	524	12.0	17.0
3	黄小波		52	188	9.0	11.0
4	石双艳		2	4	1.0	2.0
5	袁磊		6	1	1.0	1.0
6	伍锐		13	6	1.0	2.0
7	文翼平		16	32	3.0	5.0
8	张亮		3	0	0.0	0.0
9	刘澣扬		1	0	0.0	0.0