鼠疫耶尔森菌YopJ基因突变体构建、表达及其在RLR信号通路中生物活性的鉴定

• 作者: 何湘 曹叶 钟辉 马胜利 魏从文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 耶尔森菌,鼠疫 YopJ 克隆 突变体 真核表达 荧光素酶报告基因
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 466-470
• 页数: 5页
• 分类号: R378.61
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.06.015

摘要

目的 构建和表达鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)效应蛋白YopJ C172A、F177L、K206E突变真核表达载体,并检测其在RIG Ⅰ样受体(RLR)信号通路中的生物活性.方法 通过PCR和测序检测pCMV-Myc-YopJ的准确性,将重组PCR技术获得的3种突变体的突变片段定向克隆到pCMV-Myc载体中,在HEK293细胞中瞬时表达,并利用荧光素酶报告基因技术检测YopJ及其3种突变体对环二鸟苷酸(c-di-GMP)激活干扰素-β(IFN-β)转录活性的影响.结果 成功构建3种突变的真核表达质粒,在c-di-GMP刺激情况下,YopJ F177L、YopJ K206E与YopJ相比,对IFN-β转录活性的抑制作用没有显著差异,而YopJ C172A与YopJ有极显著差异,对IFN-β的抑制作用明显降低.结论 YopJ 172位是其抑制RLR信号通路的酶活性位点,与文献报道一致,而177位或206位则没有这种作用,这为进一步探究YopJ参与Y.pestis致病性的作用靶点和机制打下了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
2	何湘	军事医学科学院疾病预防控制所	13	48	4.0	6.0
3	魏从文	军事医学科学院生物工程研究所	9	12	2.0	2.0
4	曹叶	安徽大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
8	马胜利	安徽大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0