siRNA对人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的抑制

• 作者: 叶力 廖艳研 李彧 梁冰玉 梁浩 潘沛江 苏锦明 蒋俊俊 陈晖 陈荣凤 黄颉刚
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TLR2 siRNA 人-单核巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1032-1035,1045
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.08.006

摘要

目的：筛选特异性抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的siRNA（ small interference RNA ）序列，在分子水平上初步讨论其在HIV治疗方面的前景。方法：在基因库中寻找TLR2基因的mRNA序列，针对TLR2基因设计并合成3条siRNA，阳性对照为人类看家基因GAPDH siRNA，阴性对照为6-羧基荧光素标记的siRNA（ NC-FAM）。采集健康人新鲜外周血，分离单个核细胞，再经贴壁法培养纯化为人-单核巨噬细胞。采用阳离子脂质体试剂Lipofectamine 2000介导转染培养的人-单核巨噬细胞。用q-PCR法测定干扰后单核巨噬细胞的TLR2 mRNA的表达，Western blot 法测定干扰后TLR2蛋白表达。结果：转染72 h后，阳性对照组GAPDH mRNA及蛋白的表达明显降低（ P＜0.05）。 siRNAs组TLR2 mRNA表达水平整体有显著性差异（F＝41.957，P＜0.001），与阴性对照组比较，TLR2 siRNA各组的TLR2 mRNA相对表达水平均明显降低（P＜0.05），抑制率分别为46％、43％、43％。 WB结果显示，TLR2 siRNA各组的TLR2蛋白表达量显著降低（ P＜0.05）。结论：本研究设计的siRNA能够有效抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因的表达，从分子免疫学角度出发，表明通过阻断siRNA介导的TLR2信号传导通路能够为HIV治疗提供新思路。