重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定

• 作者: 倪谷音 徐正中 杨卫冲 毛爱民 范锋 陈祥
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛 γ-干扰素 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 76-79
• 页数: 4页
• 分类号: S855.2
• 字数: 3744字
• 语种: 中文

摘要

根据黑白花奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γ cDNA,并将其定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序后,分别转化大肠杆菌BL21 (DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别表达出大小在23和43 ku左右的融合蛋白.通过对诱导剂的浓度、诱导起始时间、诱导持续时间的筛选,对表达条件进行了优化,BL21 (DE3) /pET-30a(+)-BovIFN-γ与BI21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融合蛋白的相对表达量最高时可分别达到菌体总蛋白的60％和45％左右.使用纯化的融合蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ进行细胞病变抑制试验,证实表达产物具有较高抗病毒感染活性,在牛肾细胞(MDBK)上抑制水疱性口炎病毒的活性分别为2.15×107和1.21×105 U· mg-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈祥	扬州大学生物科学与技术学院	57	525	11.0	22.0
2	毛爱民		35	44	4.0	5.0
3	范锋		24	26	2.0	3.0
4	徐正中	扬州大学生物科学与技术学院	12	12	2.0	3.0
5	倪谷音		9	7	2.0	2.0
6	杨卫冲	扬州大学生物科学与技术学院	2	52	1.0	2.0