牛γ-干扰素在大肠杆菌中的表达及抗原性鉴定

• 作者: 乔明明 刘巧荣 孙明 曹振 杨璐 田克恭 申屠芬琴 陈西钊 马永缨
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牛γ干扰素 原核表达 抗原性 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-42
• 分类号: R33
• 字数: 3053字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2012.02.009

摘要

目的 在大肠杆菌中高效表达牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),并对其生物活性进行初步鉴定.方法 依据GenBank上基因序列人工合成BovIFN-γ基因,PCR方法扩增该基因,将其插入PET-28a载体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21中,在IPTG诱导下表达BovIFN-γ,并进行Western blot鉴定.Ni-NTA亲和层析法和电洗脱方法纯化表达的重组蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ检测试剂盒进行重组蛋白的抗原性检测.结果 成功构建了BovIFN-γ原核表达载体PET-28a- BIFN-γ,并在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的32％,表达产物主要以可溶性形式存在于菌体裂解液上清中；重组蛋白可与BovIFN-γ单克隆抗体反应,Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白抗原活性比电洗脱方法纯化的抗原活性高.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的BovIFN-γ蛋白,可与BovIFN-γ单抗发生反应,纯化的重组蛋白具有良好的反应原性.