DPC4/Smad4基因RNA干扰靶点设计和慢病毒载体制备

• 作者: 仲丽丽 周忠光 张维嘉 李洋 白云
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: DPC4/Smad4 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1456-1459
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.08.015

摘要

目的:DPC4/Smad4基因RNA干扰靶点的设计和RNA干扰靶点慢病毒载体制备.方法:针对DPC4/Smad4基因序列,并利用网站设计程序,依据RNA干扰序列设计的原则,设计多个RNA干扰靶点序列.根据设计经验和设计软件将其进行评估测定,选择最佳动力学参数靶点进入其后续的实验流程;生工生物合成含干扰序列的DNA oligo,具有严格的检测体系(PAGE纯化体系),其两端含酶切位点粘端,直接连入酶切后的RNA干扰载体上.将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞,并且对长出的克隆进行酶切鉴定.然后挑选出阳性克隆测序,进行测序比对后,鉴定阳性的克隆即为构建成功的目的基因RNA干扰慢病毒载体.将构建的慢病毒载体以及辅助包装载体质粒共转染到293T细胞.收获含有病毒的细胞培养上清,浓缩后进行滴度测定,并检测其感染性.另外应用荧光实时定量PCR检测在感染的293T细胞中敲减效果.结果:成功构建DPC4/Smad4 shRNA的慢病毒载体LVshSmad4,并成功制备DPC4/Smad4 shRNA慢病毒,三株病毒感染细胞后均具有有效的敲减效应,其中SH1最为显著.结论:DPC4/Smad4基因RNA干扰靶点的成功设计和RNA干扰靶点慢病毒制备,为以后探讨DPC4/Smad4基因与肿瘤的相关性治疗提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周忠光		142	1067	17.0	25.0
2	李洋		20	69	4.0	8.0
3	白云		57	358	9.0	16.0
4	仲丽丽	黑龙江中医药大学附属第一医院病理科	49	222	9.0	12.0
5	张维嘉	哈尔滨市第一医院骨外科	11	38	4.0	6.0