草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建

• 作者: 余德光 张好放 李志斐 王广军 谢骏 郁二蒙
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 克隆 真核表达载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 页码范围: 120-128
• 页数: 9页
• 分类号: S965.112|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2017.04.13

摘要

为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644 bp.其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1、pcDNA3.1(+)-Smad4.另一方面,根据TGFβ1、Smad4基因序列全长分别设计3对长度为48 bp的shRNA,然后将构建好的shRNA插入到载体pRNA-U6.1/Neo中,即可成功构建TGF-β1、Smad4基因的RNA干扰表达载体pRNA-U6.1/Neo-TGF-β1和pRNA-U6.1/Neo-Smad4.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢骏	中国水产科学研究院珠江水产研究所	187	2128	25.0	33.0
2	王广军	中国水产科学研究院珠江水产研究所	192	1562	21.0	29.0
3	余德光	中国水产科学研究院珠江水产研究所	81	963	17.0	26.0
4	郁二蒙	中国水产科学研究院珠江水产研究所	28	223	9.0	14.0
5	李志斐	中国水产科学研究院珠江水产研究所	18	77	6.0	7.0
6	张好放	中国水产科学研究院珠江水产研究所	1	1	1.0	1.0