小鼠Smad4基因慢病毒表达载体构建及在293T细胞中的表达

• 作者: 侯昭晖* 孙毓晗* 肖玉丽
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Smad4 慢病毒
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 112-117
• 分类号: R764.3
• 字数: 4984字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2013.01.026

摘要

目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础.方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况.结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致.pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达.293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍.病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml.结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖玉丽	哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科	34	220	9.0	13.0
2	孙毓晗*	哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科	1	0	0.0	0.0
3	侯昭晖*	中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军总医院耳鼻喉研究所	1	0	0.0	0.0