携带人AKT2、PDK1、BAD基因的慢病毒表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

• 作者: 朱静 李为民 陈勃江 黄娜
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: AKT2 BAD PDK1 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 非小细胞肺癌
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 肺癌分子病理与临床诊疗进展
• 页码范围: 299-303
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT2)、磷酸肌醇依赖激酶-1(phosphoinositide-dependent kinase 1,PDK1)、bcl-2相关性死亡蛋白(bcl-2-associated death protein,BAD)基因的绿色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达.方法 选择病理证实的非小细胞肺癌(NSCLC)组织,采用特异性引物RT-PCR扩增AK T2、PDK1及BAD cDNA.将PCR产物与T载体连接测序,测序正确的目的片段从T载体上酶切下与慢病毒骨架质粒连接,将此重组的慢病毒表达载体质粒及包装系统共转染入293T细胞(人胚肾细胞系),收集病毒上清,Western blot检测AKT2,BAD及PDK1蛋白质表达.结果 凝胶电泳证实AK T2,BAD,PDK1三基因成功转导至以pCDF1-MCS2-EF 1-copGFP为骨架质粒的慢病毒包装系统中,磷酸钙转染法72h后BAD、PDK1及AK T2的转染率分别约为100％、95％、90％.慢病毒包装后测定3种病毒滴度均达6.7×106PFU/mL,并通过Western blot法检测到AKT2,BAD,PDK1蛋白在293T细胞的表达.结论 成功构建了携带人AKT2、BAD、PDK1原癌基因的慢病毒表达载体,在293T细胞中成功鉴定其表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈勃江	四川大学华西医院呼吸内科	52	355	9.0	16.0
2	李为民	四川大学华西医院呼吸内科	186	1195	17.0	27.0
3	朱静	绵阳市中心医院呼吸内科	18	128	8.0	11.0
7	黄娜	成都医学院第一附属医院呼吸内科	23	93	6.0	9.0