Kras突变基因真核表达载体的构建及在不同肝细胞株中的表达

• 作者: 叶奕菁 张晶晶 郭翔 陆小军
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: Kras 突变 绿色荧光蛋白 基因转染
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 18-22
• 分类号: Q75|Q78|R730.231
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.01.004

摘要

目的:构建携带突变Kras基因,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入两种不同的肝细胞株中表达.方法:PCR扩增突变Kras目的基因,将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1上,枸建重组质粒载体.并利用脂质体转染人肝癌细胞株Huh7.5和鸡肝癌细胞株LMH,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察Kras-EGFP融合蛋白在细胞中的表达;用Western Blotting方法验证Kras蛋白水平的表达.结果:酶切和测序证实pEGFP-N1-Kras重组质粒构建正确,将EGFP报告基因融合在突变的Kras基因的3'端;在Huh 7.5和LMH中均观察到了绿色荧光,转染率分别为19％和53％; Western Blotting也检测到融合蛋白的表达.结论:通过基因克隆方法成功构建了pEGFP-N1-Kras重组质粒载体,并且在Huh7.5和LMH中均稳定表达,为下一步筛选针对突变Kras基因的靶向药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭翔	中山大学肿瘤防治中心鼻咽科	16	145	7.0	11.0
2	张晶晶	中山大学附属中山医院肿瘤放疗科	16	43	5.0	6.0
6	叶奕菁	中山大学附属中山医院肿瘤放疗科	3	8	2.0	2.0
7	陆小军	中山大学附属中山医院肿瘤放疗科	5	18	3.0	4.0