uPA-siRNA重组慢病毒载体感染兔软骨细胞对uPA和MMP-3表达的影响

• 作者: 史晨辉 张振东 李长俊 王维山 郭风劲 陈安民
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: RNA,小分子干扰 慢病毒载体 软骨细胞 尿激酶型纤溶酶原激活物 基质金属蛋白酶3
• 年，卷（期）: 2014,（15）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 1892-1895
• 页数: 4页
• 字数: 3100字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2014.15.024

摘要

目的：靶向特异尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）‐siRNA慢病毒表达载体并加载绿色荧光蛋白（GFP）后转染软骨细胞，观察其对软骨细胞表达uPA和基质金属蛋白酶3（MMP‐3）的影响。方法培养软骨细胞并根据实验分为实验组（转染uPA‐siRNA慢病毒载体）、空载体组（转染空慢病毒载体）、空白对照组（未进行任何处理）和 TIMP组（加载 MMP特异性抑制剂TIMP）。实验组：uPA‐siRNA序列经慢病毒包装并加载GFP ，通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞；空载体组：将慢病毒载体通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞；空白对照组正常培养软骨细胞；药物对照组：培养基中加特异性M M P抑制剂。所有细胞培养96 h后应用逆转录‐聚合酶链反应（RT‐PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）法分别检测软骨细胞uPA mRNA、MMP‐3 mRNA和蛋白的表达水平。结果慢病毒载体可成功转染到原代软骨细胞中，在感染复数（MOI）为100时转染率达到85％以上。实验组uPA mRNA、uPA蛋白和MMP‐3 mRNA及MMP‐3蛋白的表达水平显著低于空载体组和空白对照组（P＜0．01），而与药物干预组差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 uPA‐siRNA慢病毒载体负载GFP可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因、蛋白表达，同时对M M P‐3基因、蛋白表达也呈现高效抑制作用。抑制uPA的水平可降低显著M M P‐3表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
2	李长俊	石河子大学医学院	4	46	3.0	4.0
3	张振东	石河子大学医学院	6	47	3.0	6.0