慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖

• 作者: 史晨辉 张振东 李长俊 王维山 郭风劲 陈安民
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA RNA干扰 慢病毒载体 软骨细胞 增殖
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 602-609
• 页数: 8页
• 分类号: R684.3
• 字数: 3224字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响.方法 根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列.各序列经慢病毒包装后,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞后,用RT-PCR和Western blot法分别检测uPA-siRNA对细胞内uPA mRNA和蛋白表达水平的抑制效果,用CCK-8法检测uPA-siRNA对软骨细胞增殖的影响.结果 成功构建4对uPA-siRNA序列并筛选出用于后续实验的高效靶向P2序列,各序列经慢病毒载体包装并成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数(MOl)为100时感染率达到85％以上.P1 、P2 、P3和P4均可抑制软骨细胞中uPA基因及蛋白的表达,但P2沉默效果最好,基因抑制率达到70％,感染后软骨细胞的增殖受到促进.结论 成功构建高效靶向uPA-siRNA慢病毒载体,证实其可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因表达并促进软骨细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
2	史晨辉	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	35	369	11.0	18.0
4	王维山	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	21	196	8.0	13.0
6	李长俊	新疆石河子大学医学院	6	75	6.0	6.0
7	张振东	新疆石河子大学医学院	4	41	4.0	4.0
12	陈安民		1	7	1.0	1.0